Une dose répétée de NRPT augmente les taux de NAD +

Une dose répétée de NRPT (nicotinamide riboside et ptérostilbène) augmente les taux de NAD + chez les humains de façon sûre et durable: une étude randomisée, en double aveugle, contrôlée contre placebo

Le NRPT est une combinaison de nicotinamide riboside (NR), une vitamine précurseur de nicotinamide adénine dinucléotide (NAD +) trouvée dans le lait, et de ptérostilbène (PT), un polyphénol trouvé dans les myrtilles. Ici, nous rapportons cet essai clinique sur le premier humain conçu pour évaluer la sécurité et l'efficacité d'une dose répétée de NRPT (connu commercialement sous le nom de base). NRPT a été évalué dans une étude randomisée, en double aveugle et contrôlée par placebo dans une population de 120 adultes en bonne santé entre les âges de 60 et 80 ans. L'étude comprenait trois groupes de traitement: placebo, dose recommandée de NRPT (NRPT 1X) et double dose de NRPT (NRPT 2X). Tous les sujets ont pris leur supplément quotidien à l'aveuglette pendant huit semaines. L'analyse de NAD + dans le sang total a démontré que NRPT augmente significativement la concentration de NAD + de manière dose-dépendante. Les taux de NAD + ont augmenté d'environ 40% dans le groupe NRPT 1X et d'environ 90% dans le groupe NRPT 2X après 4 semaines, comparativement au placebo et à la valeur initiale. De plus, cette augmentation significative des niveaux de NAD + a été maintenue tout au long de l'essai de 8 semaines. Niveaux NAD + n'a pas augmenté pour le groupe placebo au cours de l'essai. Aucun événement indésirable grave n'a été signalé dans cette étude. Cette étude montre qu'une dose répétée de NRPT est un moyen sûr et efficace d'augmenter durablement les taux de NAD +.

Il a été démontré que le maintien d'un métabolisme cellulaire efficace joue un rôle central dans la prévention des pathologies associées à l'âge et dans la régulation de la longévité. La fonction métabolique dépend de la chorégraphie critique entre les coenzymes et les protéines de transduction du signal agissant comme des capteurs intégraux du métabolisme. NAD + joue un rôle canonique en facilitant le transfert d'hydrogène dans les principales voies métaboliques, comme la conversion de NAD + en NADH pour le métabolisme mitochondrial et l'ATP subséquent. La synthèse, qui est la monnaie d'énergie des cellules. La famille des enzymes sirtuines (SIRT1-7) sont des déacylases dépendantes du NAD + et des régulateurs clés du vieillissement. Au-delà de son rôle de cosubstrat pour les sirtuines, NAD + est également un cosubstrat pour d'autres enzymes clés, notamment les poly (ADP-ribose) polymérases. Les enzymes NAD + sont impliquées dans un large éventail d'activités, notamment la réparation des lésions de l'ADN, la fonction mitochondriale, l'intégrité chromosomique, l'expression des gènes, les modifications épigénétiques et post-traductionnelles et la signalisation du calcium5. Lorsque le NAD + est utilisé comme cosubstrat, il est consommé (hydrolysé), ce qui nécessite une biosynthèse NAD + cellulaire constante par des voies qui commencent par les précurseurs présents dans l'alimentation, notamment la vitamine B3. Il existe plusieurs formes de vitamine B3: l'acide nicotinique (NA), le nicotinamide (NAM), le nicotinamide mononucléotide (NMN) et le nicotinamide riboside (NR). Plus précisément, lorsque NR a été examiné en tête-à-tête avec NA et NAM chez la souris, NR a présenté une pharmacocinétique unique qui a abouti à des concentrations de NAD + pic significativement plus élevées dans le foie ainsi que la production significative des niveaux plus élevés de plusieurs précurseurs NAD + intermédiaires, y compris le NMN, le mononucléotide de l'acide nicotinique (NaMN) et l'acide nicotinique adénine dinucléotide (NAAD) .

De nombreuses études ont démontré que les taux de NAD + diminuent avec l'âge, incluant deux études chez l'homme qui rapportent des niveaux réduits dans la peau et le cerveau. Comme les niveaux de NAD + diminuent avec l'âge, les précurseurs NAD + peuvent avoir une valeur significative Santé. L'efficacité des précurseurs NAD + dans la prévention des problèmes de santé liés à l'âge a été confirmée par plusieurs études récentes sur des animaux. Une étude a démontré que la dysfonction mitochondriale, caractéristique du vieillissement, était causée par la baisse des taux de NAD + chez les animaux âgés. Remarquablement, une semaine d'administration de NMN chez de vieilles souris s'est révélée inverser le dysfonctionnement mitochondrial observé d'une manière nécessitant la sirtuine, SIRT1.

Dans une autre étude, on a montré que le NR inversait le déclin du nombre et de la fonction des cellules souches adultes chez les vieilles souris de type sauvage. On a également montré que le NR augmentait significativement la durée de vie de ces animaux. L'allongement de la durée de vie Dans ces modèles, la reconstitution NR des taux de NAD + a permis d'améliorer la qualité des mitochondries et d'améliorer la réparation de l'ADN.

Il a également été démontré que le traitement par NR stimule le métabolisme oxydatif chez les souris et les protège contre l'obésité induite par l'alimentation riche en graisses. Les souris supplémentées en NR stimulées avec un régime riche en graisses n'ont pas pris autant de poids que les souris témoins, et a montré une oxydation accrue des acides gras, une sensibilité accrue à l'insuline et une augmentation de la dépense énergétique. En outre, NR a augmenté la biogenèse mitochondriale dans le tissu musculaire et amélioré la performance d'endurance de ces animaux. De plus, les souris supplémentées en NR ont montré une capacité accrue à maintenir la température corporelle pendant l'exposition au froid.

NAMPT est l'étape limitante dans la voie de récupération NAD +, qui génère NAD + en combinant le nicotinamide et le phosphoribosyl pyrophosphate. Des souris knock-out NAMPT spécifiques au muscle ont montré une baisse de 85% des niveaux de NAD + intramusculaire et une accélération de la dégénérescence musculaire liée à l'âge entraînant une perte de force et d'endurance.Similairement, les anciennes souris sauvages présentaient également des taux réduits de NAMPT et de déclin musculaire. L'administration de NR a rapidement amélioré la dégénérescence musculaire déclenchée par le vieillissement, entraînant une augmentation de la force et de l'endurance à la fois chez les souris knock-out NAMPT et les anciennes souris de type sauvage. De plus, NR s'est avéré plus efficace que NAM dans ce modèle.

Le premier essai clinique humain utilisant NR, une étude croisée sur douze adultes en bonne santé, a démontré qu'une dose unique de NR augmentait significativement les taux de NAD + dans le sang sur une période de 24 heures. Cette étude a également montré des augmentations du métabolome NAD + au cours de cette période. Cependant, la question restait à savoir si les augmentations de NAD + pourraient être maintenues sur des périodes plus longues par l'administration quotidienne de NR.

NRPT est une combinaison de NR et de ptérostilbène (PT), un analogue naturel du polyphénol resvératrol, qui s'est avéré être un activateur SIRT1 puissant.Malgré l'effet physiologique bénéfique rapporté du resvératrol, sa biodisponibilité chez les humains est faible. PT présente une plus grande biodisponibilité due à la présence de deux groupes méthoxy qui lui permettent d'avoir une absorption lipophile et orale accrue, ainsi qu'une demi-vie plus longue due à une oxydation réduite. Sur la base de ces considérations, la combinaison de Il est prédit que NR et ptérostilbène soutiennent synergiquement la santé métabolique par le biais de NR fournissant NAD + aux sept sirtuines et pterostilbene fournissant une activation supplémentaire de SIRT1. On sait que les sirtuines interviennent dans les réponses aux signaux nutritionnels et environnementaux, y compris les effets bénéfiques sur la santé de la restriction calorique. De plus, l'activation dépendante de NAD + régule les processus physiologiques importants tels que le rythme circadien, le métabolisme du glucose et des graisses. vieillissement.

Par conséquent, nous avons étudié l'innocuité et la tolérabilité de NRPT ainsi que son efficacité dans le maintien de niveaux élevés de NAD + dans un essai randomisé, en double aveugle, contrôlé contre placebo de 120 adultes âgés de 60 à 80 ans. Cet essai représente la première répétition essai de dose pour NR ainsi que le premier test de la combinaison de NR et PT chez les humains. Nous rapportons que NRPT augmente les niveaux de NAD + de manière sûre et durable.

Résultats

Aperçu de l'essai

L'innocuité et l'efficacité de NRPT, un supplément combinant le nicotinamide riboside et le ptérostilbène, ont été étudiées chez 120 participants dans le cadre d'un essai clinique randomisé, en double aveugle, contrôlé contre placebo et à doses répétées. Cet essai comprenait trois groupes de 40 sujets sains âgés de 60 à 80 ans: placebo, NRPT à la dose recommandée (NRPT 1X, 250 mg de NR plus 50 mg de PT) et NRPT à double dose (NRPT 2X; de NR plus 100 mg de PT). Chaque sujet a pris son traitement assigné par voie orale, au petit déjeuner, tous les jours pendant 8 semaines. Du sang a été prélevé au départ, à 4 semaines et à 8 semaines pour évaluer l'innocuité et l'efficacité de l'élévation des concentrations de NAD + dans le sang total avec un suivi de 30 jours après l'arrêt de la supplémentation. 

Tous les participants ont été analysés dans la population en intention de traiter (ITT), avec 40 participants dans le groupe NRPT 1X, 38 dans le groupe NRPT 2X et 40 dans le groupe placebo. Les données recueillies auprès du groupe ITT ont été analysées pour tous les paramètres de sécurité. Cent treize participants (113) ont été analysés dans la population par protocole (PP), avec 40 participants dans le groupe NRPT 1X, 33 dans le groupe NRPT 2X et 40 dans le groupe placebo (figure 1b). Sept participants ont été retirés de la population totale pour l'analyse par protocole; un participant a été inscrit à tort à l'étude, trois participants ont retiré leur consentement, deux participants avaient un faible taux de conformité à la recherche (conformité inférieure à 70%) et un participant n'était pas conforme aux procédures d'étude. Les données du groupe PP ont été analysées lorsqu'une erreur de confusion serait clairement introduite en raison du manque de conformité au protocole. Lors de la randomisation, les participants étaient bien appariés entre les groupes et la conformité dans tous les groupes dépassait 94%. La population ITT a été utilisée pour toutes les analyses à l'exception des analyses NAD + et de la mobilité, où la population PP a été analysée pour éliminer les erreurs de non-conformité.

La démographie des participants des groupes NRPT 1X, NRPT 2X et placebo correspondait bien à l'âge, au sexe, à l'IMC, au tabagisme, à la race et à l'origine ethnique. Sur 120 participants randomisés dans la population de sécurité, 87% se sont identifiés comme étant blancs d'Europe occidentale, entre 60 et 79 ans, avec un IMC de 18 à 35 kg / m 2. Soixante et un pour cent étaient des non-fumeurs et 68% étaient des femmes. La consommation d'alcool était généralement répartie de manière égale entre les participants, 91% d'entre eux étant des utilisateurs occasionnels, hebdomadaires ou quotidiens, mais aucun n'étant classé comme un gros consommateur .

Evénements indésirables

Un total de 66 événements indésirables (EI) ont été rapportés par 45 participants. Parmi ceux-ci, 18 EI ont été signalés par 13 participants du groupe placebo, 25 par 15 participants du groupe NRPT 1X et 23 par 17 participants du groupe NRPT 2X. Il n'y avait pas de différences significatives dans l'incidence des EI entre les groupes. Il y avait un AE d'intensité légère évalué comme possiblement lié au produit placebo (prurit), un AE d'intensité légère évalué comme possiblement lié au NRPT 1X (nausée) et cinq EI (fatigue modérée, céphalée légère, dyspepsie modérée, malaise et diarrhée) signalés par cinq participants du groupe NRPT 2X. Quatre de ces EI ont été évalués comme étant possiblement liés à NRPT 2X, alors qu'un EI (diarrhée) a été évalué comme étant probablement lié à NRPT 2X. Tous les autres effets indésirables ont été classés comme improbables ou non liés au produit expérimental. Tous les participants ayant signalé des EI ont été rétablis et aucun EI grave n'a été signalé au cours de cette étude clinique.

NRPT augmente NAD +

Le sang total a été prélevé au départ, au jour 30 et au jour 60, chez tous les sujets pour une analyse NAD + ultérieure. La collecte était à pH 5, ce qui a conduit à la lyse des globules rouges mais a conservé le NAD + pour analyse. Une méthode conforme aux BPL a été développée pour analyser le NAD + à partir de lysats de sang total humain par chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS / MS). Le groupe placebo n'a montré aucune augmentation de NAD + au cours de la période de traitement de 60 jours. Cependant, les concentrations de NAD + ont augmenté significativement de manière dose-dépendante à 30 jours; Les taux de NAD + ont augmenté d'environ 40% dans le groupe NRPT 1X et d'environ 90% dans le groupe NRPT 2X par rapport à la valeur initiale . L'augmentation de 40% de la concentration de NAD + observée dans le groupe NRPT 1X s'est maintenue à 60 jours. L'augmentation des taux de NAD + observée dans le groupe NRPT 2X s'est maintenue à environ 55% par rapport à la valeur initiale à 60 jours. Cette augmentation est restée significativement plus élevée que le groupe NRPT 1X à 60 jours. Les augmentations au sein du groupe des groupes NRPT 1X et NRPT 2X au jour 30 et au jour 60 étaient significatives, tout comme les différences entre les groupes à ces moments. Ainsi, NRPT augmente significativement les niveaux de NAD + de manière soutenue.

NRPT 1X et les enzymes hépatiques

Les enzymes hépatiques dans le sang ont également été déterminées comme une mesure de la santé de cet organe. Les tests hépatiques étaient dans les limites normales au départ pour tous les sujets. Il n'y a eu aucun changement dans les tests de la fonction hépatique pour aucun groupe (placebo, NRPT 1X ou NRPT 2X) sauf une diminution significative du test ALT (alanine transaminase) à 30 et 60 jours dans le NRPT 1X par rapport à la base (Tableau 2). Une tendance similaire qui n'a pas atteint la signification a également été observée pour AST (aspartate transaminase). Puisque la présence d'enzymes hépatiques dans le sang indique des anomalies de la santé du foie, les données suggèrent que NRPT 1X peut améliorer la fonction hépatique chez les adultes en bonne santé. Nous avons l'intention de poursuivre des études humaines ultérieures pour étudier davantage le rôle de NRPT sur la santé du foie.

NRPT 1X et la pression artérielle

Les signes vitaux, la fréquence cardiaque et la pression artérielle ont été mesurés chez les participants. Il n'y a eu aucun changement par rapport aux valeurs initiales à 30 ou 60 jours de fréquence cardiaque ou de pression artérielle dans tous les groupes, sauf dans le groupe NRPT 1X, où la pression artérielle diastolique diminuait significativement au jour 60.

NRPT et mobilité

Pour évaluer la mobilité dans l'étude, un test de 30 secondes sur le fauteuil et un test de marche de 6 minutes ont été utilisés. Le test du trépied de 30 secondes est utilisé pour déterminer la force du bas du corps dans une population âgée où des nombres plus élevés sont considérés comme bénéfiques pour l'individu. Le test de marche de 6 minutes mesure la distance (en mètres) qu'un individu peut parcourir à une allure normale pendant 6 minutes. Fait intéressant, le groupe NRPT 2X a montré une augmentation significative de la mobilité au sein du groupe dans le test de 30 s  et le test de marche de 6 min  à 60 jours par rapport à la ligne de base. Aucune différence n'a été observée dans le groupe placebo ou NRPT 1X.

NRPT et autres marqueurs sanguins

Après 60 jours de supplémentation quotidienne, il n'y avait pas de différence significative entre les groupes dans les paramètres d'hématologie et de chimie clinique chez les participants. Plus précisément, aucune différence significative entre NRPT 1X, NRPT 2X ou placebo n'a été observée en hémoglobine, hématocrite, globules blancs, globules rouges, volume corpusculaire moyen, hémoglobine corpusculaire moyenne, nombre de plaquettes, neutrophiles, lymphocytes, monocytes, éosinophiles ou basophiles. La concentration d'électrolytes (sodium, potassium et chlorure) et la fonction rénale, mesurées par la créatinine, étaient semblables entre les groupes tout au long de l’étude).

NRPT et lipides

L'analyse des lipides a montré des différences entre les groupes de triglycérides, mais cela était entièrement attribuable à une baisse du groupe placebo au 30e et au 60e jour. Les concentrations de triglycérides dans le groupe NRPT 1X et NRPT 2X n'ont pas changé significativement jour 60. La diminution des triglycérides dans le groupe placebo au jour 60 par rapport au départ a entraîné une différence significative entre le groupe placebo et le groupe NRPT 1X au jour 60. Le cholestérol total et le cholestérol LDL présentaient des augmentations intra-groupes au jour 30 (NRPT 2X) et au jour 60 (NRPT 1X et NRPT 2X) par rapport aux valeurs initiales. L'augmentation du cholestérol total dans le groupe NRPT 1X comparativement au groupe placebo n'était pas significative au jour 30 ou au jour 60. L'augmentation du cholestérol LDL dans le groupe NRPT 1X par rapport au groupe placebo était d'environ 3% au jour 30 et de 3,5% au jour 60. Des augmentations plus importantes du cholestérol total et du cholestérol LDL ont été observées dans le groupe NRPT 2X. Cependant, il y avait des différences significatives entre les groupes dans le cholestérol total et LDL au départ, principalement en raison de niveaux plus faibles dans le groupe placebo, confondant l'interprétation des données de l'étude.

Ainsi, nous avons stratifié les trois groupes de traitement par IMC et réanalysé les données . Les sujets du groupe NRPT 1X ayant un IMC normal (18-25) n'ont montré aucune augmentation significative du cholestérol LDL au jour 30 ou au jour 60. Les sujets du groupe NRPT 2X ayant un IMC normal présentaient des augmentations du cholestérol LDL au jour 30 et au jour 60. Les sujets de la catégorie surpoids (BMI 25-32) ont montré des augmentations du cholestérol LDL au jour 30 et au jour 60 dans les groupes NRPT 1X et NRPT 2X. Cependant, les sujets en surpoids dans le groupe placebo ont également montré une augmentation significative au jour 60. Globalement, ces résultats suggèrent une augmentation faible mais significative du cholestérol à la dose normale de NRPT, au moins pour les personnes ayant un IMC plus élevé que la normale. D'autres études sont nécessaires avec un nombre accru de sujets pour déterminer si les petits changements observés ici sont réels ou dus au hasard.

Discussion

Cette étude visait à tester NRPT dans un essai humain rigoureux de 120 personnes contrôlé par placebo, à double insu et randomisé pour l'innocuité et l'efficacité. Des études antérieures portant sur un petit nombre de sujets ont confirmé la sécurité des ingrédients de NRPT séparément, mais n'ont pas été contrôlées par placebo.7,25 Cet essai rigoureux et plus important a montré que les effets indésirables étaient bénins et répartis dans les groupes NRPT et placebo. Ainsi, NRPT est considéré comme bien toléré. Le critère principal d'efficacité de l'essai était la concentration de NAD +, qui stimule les activités des sirtuines et de nombreux autres processus qui favorisent la santé cellulaire et qui diminuent avec l'âge. Ainsi, une augmentation du NAD + constitue un élément clé de la manière dont le NRPT est envisagé pour améliorer la santé humaine. Dans un petit essai de 12 sujets, une dose unique de NR a été trouvée augmenter les niveaux de NAD + dans les globules blancs sur une période de plusieurs heures.7 Notre étude a suivi les niveaux de NAD + dans le sang total au jour 0 (baseline), jour 30, 60 jours (NRPT 1X) et 90% (NRPT 2X) augmentation de NAD + au jour 30 par rapport à la ligne de base, et cela a été pleinement soutenu au jour 60 dans le groupe NRPT 1X et partiellement diminué à 55% sur base dans le groupe NRPT 2X. Le groupe placebo n'a pas montré de changements dans les niveaux NAD +. Il n'est pas clair pourquoi le groupe NRPT 2X a montré le déclin partiel à 60 jours, mais il est possible que des niveaux extraordinairement élevés de NAD + puissent induire des mécanismes homéostatiques pour freiner d'autres augmentations. Un mécanisme possible est l'induction d'enzymes dégradant NAD +, telles que CD38.

Un rapport précédent a établi que le métabolisme de NR est semblable à celui du nicotinamide chez les humains, à l'exception de deux autres métabolites générés par NR; NAMN et NAAD (deux précurseurs NAD + connus) . En outre, NR présente un profil de toxicité similaire au nicotinamide chez le rat à des doses très élevées (par exemple, 3000 mg / kg NR). Comme le nicotinamide a été étudié comme complément alimentaire chez l'homme depuis des décennies, d'excellentes données de sécurité sur l'utilisation à long terme sont disponibles. Le comité scientifique de l'alimentation humaine de l'UE a établi que la limite supérieure de 900 mg / jour est sûre28. Ainsi, les informations de sécurité relatives à la nicotinamide associée à nos données d'innocuité présentées ici démontrent que la consommation de NR est sûre pour une utilisation quotidienne à des doses raisonnables.

Une série de paramètres sanguins ont également été mesurés chez tous les sujets, et la plupart n'ont montré aucun changement significatif au cours de l'essai. Cependant, trois mesures ont montré des différences qui ont atteint une signification statistique. Premièrement, la pression artérielle diastolique était significativement réduite au jour 60 dans le groupe NRPT 1X. Cette constatation concorde avec un petit essai antérieur montrant que le ptérostilbène seul causait une légère diminution de la pression artérielle diastolique29. Deuxièmement, l'ALT de l'enzyme hépatique montrait une diminution significative du groupe NRPT 1X aux jours 30 et 60. Une deuxième enzyme hépatique, AST, a montré la même tendance au jour 30 et au jour 60, qui n'ont pas atteint la signification. Troisièmement, une légère augmentation du cholestérol total et du cholestérol LDL a été observée dans le groupe NRPT 1X au jour 60 (environ 3% par rapport au placebo) et des augmentations plus importantes dans les groupes NRPT 2X. Lorsque les sujets étaient stratifiés selon l'IMC, les variations du cholestérol dans le groupe NRPT 1X étaient absentes dans le sous-groupe IMC normal et étaient confinées au sous-groupe surpoids. Un facteur confondant dans l'interprétation des données de cholestérol est que les sujets ont montré des différences significatives dans le cholestérol total et LDL au départ, en raison des aléas de la randomisation des sujets. De plus, la variation biologique normale du LDL chez un individu a été estimée à 9% 30. Ainsi, il est possible que seules des variations naturelles du LDL aient été observées dans cet essai.

Les changements dans les enzymes hépatiques et la biosynthèse du cholestérol attirent notre attention sur les effets possibles du NRPT sur le foie. Une possibilité est que NRPT 1X améliore la santé du foie (par exemple, en réduisant la mort des cellules hépatocytaires) et le foie plus sain montre des fonctions améliorées, y compris une modeste synthèse du cholestérol. On ne sait pas si la faible augmentation du cholestérol LDL est due à une augmentation de la taille des particules, ce qui serait bénin en ce qui concerne la santé cardiovasculaire. À titre d'exemple, les acides gras oméga-3 augmentent le cholestérol LDL en augmentant la taille des particules, mais peuvent être bénéfiques pour la santé cardiovasculaire. La détermination des niveaux d'apoB et d'apoC3 peut éclairer cette question. Une autre possibilité pour les petites augmentations du cholestérol concerne la fonction connue de SIRT1 dans la promotion du transport inverse du cholestérol à partir des cellules. Si NRPT 1X régule à la hausse SIRT1 comme prévu, une augmentation du transport inverse du cholestérol (par exemple, l'exportation à partir de cellules) pourrait expliquer les niveaux légèrement plus élevés de cholestérol dans le sang. Dans ce cas, le pronostic serait positif, puisque le cholestérol inférieur dans les macrophages devrait ralentir leur progression vers les cellules spumeuses, qui sont les initiateurs des plaques d'athérosclérose. Des essais futurs seront nécessaires pour déterminer si les effets du cholestérol (et de l'ALT) sont reproductibles.

En ce qui concerne la mobilité, la conclusion selon laquelle le groupe NRPT 2X a démontré une augmentation significative à la fois du trottoir de 30 secondes et du test de marche de 6 min à 60 jours suggère qu'une supplémentation prolongée avec NRPT peut soutenir la santé musculaire et / ou l'énergie population. Tout en étant encourageante, une étude plus approfondie est justifiée pour élucider les mécanismes à l'origine de cette augmentation observée de la mobilité. Ces études incluraient une plus grande population d'étude observée pendant une plus longue période de temps pour réduire la possibilité de voir des corrélations par hasard.

Une force tangible de cette étude est la démonstration que les taux de NAD + dans le sang total peuvent être significativement augmentés chez les humains de manière sûre et durable par une supplémentation orale en NRPT. Les limites de cette étude incluent que seule une population plus âgée a été examinée et que les résultats potentiellement prometteurs des paramètres secondaires et exploratoires (à l'exception des niveaux de NAD +) n'étaient pas suffisamment alimentés pour tirer des conclusions sans équivoque. Pourtant, cette étude représente une première étape importante sur laquelle les futures études cliniques peuvent s'appuyer.

En résumé, nous avons mené le premier essai humain contrôlé par placebo, randomisé et en double aveugle sur NRPT et constaté qu'il est bien toléré et augmente de manière significative les niveaux de NAD + dans le sang circulant d'une manière soutenue. D'autres paramètres mesurés dans l'essai fournissent une base pour de futurs essais, par exemple, en suggérant que NRPT peut avoir des effets salutaires sur la fonction et la mobilité du foie. Nous notons qu'il existe suffisamment de données précliniques chez la souris et le rat pour démontrer que l'activation de SIRT1, y compris l'activation par les polyphénols et les précurseurs NAD +, a des effets bénéfiques sur la fonction hépatique. Les données précliniques montrent également les effets bénéfiques des précurseurs NAD + et des polyphénols sur les troubles musculaires, le diabète et la santé cardiovasculaire et cérébrale. Si certains de ces avantages seront observés chez les humains est une question maintenant ouverte à l'enquête.

Méthodes

Essai clinique

Cet essai clinique humain a été mené conformément aux principes éthiques qui ont leurs origines dans la Déclaration d'Helsinki et ses modifications ultérieures . Cette étude a été revue par la Direction des produits de santé naturels et sans ordonnance (DPSNSO) , Santé Canada et un comité d'éthique de la recherche. L'avis d'autorisation a été accordé le 11 décembre 2015 par la DPSNSO, à Ottawa (Ontario), et l'approbation inconditionnelle a été accordée le 23 décembre 2015 par le Conseil d'examen institutionnel (IRB Services, Aurora, Ontario)

Cette étude était une étude randomisée, en double aveugle, contrôlée par placebo menée sur trois sites. Les sites d'essais étaient à Londres, en Ontario (Canada), à Orlando, en Floride, et à Irvine, en Californie. La phase d'intervention était de 8 semaines avec une période de suivi de 30 jours. Tous les participants qui répondaient aux critères d'inclusion et non d'exclusion au dépistage ont été randomisés en trois groupes: placebo, dose recommandée de NRPT (NRPT 1X) et double la dose recommandée de NRPT (NRPT 2X). L'étude a recruté des sujets à partir de janvier 2016 et a achevé la phase inhumaine de l'essai en juillet 2016 après l'inscription complète et suffisamment de temps pour tous les patients sous protocole complet.

L'objectif principal de cette étude était d'évaluer l'innocuité et la tolérabilité de deux doses de NRPT chez des participants âgés pendant et après huit semaines de traitement. Les paramètres de sécurité mesurés comprenaient un examen clinique standard, des EI autodéclarés, une numération globulaire complète (CBC), des électrolytes (Na, K, Cl), la fonction rénale (créatinine) et la fonction hépatique (AST, ALT, GGT et bilirubine). Les objectifs secondaires de l'étude comprenaient des évaluations des avantages potentiels de NRPT dans l'augmentation de la concentration de NAD + dans le sang et l'amélioration du métabolisme des lipides.

Participants

Les critères d'inclusion étaient les suivants: hommes et femmes âgés de 60 à 80 ans ayant un indice de masse corporelle (IMC) compris entre 18 et 35 kg / m2 (± 1 kg / m2). Les participants ont convenu d'éviter de prendre des suppléments de vitamine B3 (acide nicotinique, nicotinamide ou nicotinamide riboside) ou de multivitamines 14 jours avant la randomisation et pendant la durée de la période d'étude. Les participants étaient en bonne santé comme déterminé par les résultats de laboratoire, les antécédents médicaux et l'examen physique. Les personnes ont donné leur consentement volontaire, écrit et éclairé pour participer à l'étude.

Les personnes étaient exclues si elles présentaient l'une de ces caractéristiques: troubles médicaux instables, antécédents de maladie chronique importante ou de maladie cliniquement active dans les 3 mois suivant l'entrée dans l'étude, antécédents d'insuffisance rénale ou hépatique, endocrinienne, inflammatoire, cardiovasculaire, gastro-intestinale, neurologique maladie psychiatrique, néoplasique ou métabolique, troubles médicaux significatifs ou non traités, y compris ischémie myocardique récente ou infarctus, angine instable, hypertension incontrôlée, SIDA, malignité, épilepsie et maladie cérébrovasculaire récente, ayant récemment subi une lésion traumatique, une infection ou une intervention chirurgicale, antécédents de carence en pellagre ou en niacine, prenant actuellement des médicaments hypolipémiants, utilisation de produits de santé naturels contenant du nicotinamide riboside dans les 14 jours précédant la randomisation et pendant l'étude. Les participants ayant un antécédent ou un diagnostic actuel de tout cancer (à l'exception d'un carcinome basocellulaire traité avec succès) diagnostiqué moins de cinq ans avant le dépistage ont également été exclus. Les volontaires atteints d'un cancer en rémission complète plus de cinq ans après le diagnostic ont été acceptés. Les sujets ont également été exclus s'ils avaient participé à un essai clinique avec un médicament expérimental au cours des trois mois précédant la première dose de la présente étude, consommation d'alcool de plus de deux boissons alcoolisées standard par jour, antécédents d'alcoolisme ou d'abus de drogues dans l'année précédant le dépistage, antécédents d'allergies significatives, d'allergie ou de sensibilité à l'un des ingrédients du produit expérimental ou de marijuana médicinale utilisée. Les sujets ont été exclus s'ils ont déclaré des résultats de laboratoire anormaux cliniquement significatifs au dépistage ou s'ils avaient une déficience cognitive et / ou s'ils étaient incapables de donner un consentement éclairé.

Intervention

Le produit expérimental NRPT contenait 125 mg de NR et 25 mg de ptérostilbène par capsule. Chaque capsule contenait également les ingrédients non alimentaires cellulose microcristalline, dioxyde de silicium, stéarate de magnésium, gélatine. Les capsules placebo étaient constituées de cellulose microcristalline, de dioxyde de silicium, de stéarate de magnésium et de gélatine. Pendant la période d'intervention, deux groupes ont reçu le supplément expérimental tandis que le troisième groupe a reçu des capsules placebo. Tous les sujets ont pris quatre capsules par jour. Tous les participants ont reçu deux bouteilles contenant des capsules (Bouteille A et Bouteille B) et on leur a demandé de prendre deux capsules de chaque bouteille par jour. Le bras NRPT 1X a été fourni avec la bouteille A contenant du NRPT et la bouteille B contenant des capsules placebo; Le bras NRPT 2X a été fourni avec la bouteille A contenant du NRPT et la bouteille B contenant des capsules de NRPT. Un bras placebo a été fourni à la bouteille A contenant un placebo et une bouteille B contenant des capsules placebo.

Randomisation et aveuglement

Un calendrier de randomisation a été préparé en utilisant la randomisation en bloc par une personne non aveugle sur le site d'étude qui n'a pas participé à l'évaluation de l'étude. La séquence d'allocation aléatoire a été générée en utilisant www.randomization.com. Une séquence aléatoire de traitements a été générée en utilisant 20 blocs de 6 (utiliser la graine # 12081 pour tirer sur le site Web). Cette séquence aléatoire de traitements a ensuite été associée à une permutation aléatoire de 120 numéros de 616 001 à 616 120 (utiliser la graine n ° 7123). Le produit expérimental, le NRPT, et le placebo ont été scellés dans des flacons identiques, étiquetés conformément aux directives ICH-GCP et aux directives réglementaires locales applicables. Les capsules de placebo ont imité la taille, la forme et la couleur des capsules de produit de recherche. Le produit expérimental a été étiqueté par un personnel non aveugle de KGK Synergize qui n'était pas impliqué dans les évaluations de l'étude. Tout le personnel de la clinique impliqué dans la distribution des produits, la collecte des données et les tableaux de suivi et l'analyse des résultats sont restés aveugles pendant toute la durée de l'étude.

Visites de cliniques

Les bénévoles admissibles sont retournés à la clinique le matin après un jeûne de 12 heures (sans nourriture ni boisson, sauf l'eau) pour les évaluations de base. Un examen physique a été effectué où le poids a été mesuré et l'IMC calculé. Des mesures de tension artérielle au repos et de fréquence cardiaque ont également été prises. Des échantillons de sang à jeun ont été recueillis pour le glucose à jeun, le panel de lipides, hs-CRP, CBC, électrolytes (Na, K, Cl), la créatinine, AST, ALT, GGT, bilirubine, PBMC, et l'analyse NAD +.

Collecte d'échantillons et préparation pour l'analyse NAD +

Avant la collecte de sang, 1 ml d'acide perchlorique 0,5 M (PCA) a été réparti en aliquotes dans quatre flacons à bouchon à vis cryogéniques avec des joints et placés sur de la glace humide. Jeûne 4 mL d'échantillons de sang total ont été prélevés dans des tubes de citrate de sodium pour l'analyse du nicotinamide adénine dinucléotide (NAD +). Les tubes ont été inversés doucement quatre fois et placés immédiatement sur de la glace humide. Des aliquotes de sang total de 0,1 ml ont ensuite été transférées dans chaque tube cryogénique et doucement retournées quatre fois, puis placées sur de la glace humide. Ce traitement a lysé toutes les cellules sanguines. Enfin, les bouchons vissés ont été remplacés et les tubes conservés sur glace ont ensuite été stockés à -80 ° C jusqu'à leur analyse.

Analyse NAD + à partir de lysat de sang total

Les échantillons ont été décongelés et centrifugés à 13 000 tr / min pendant 5 minutes à température ambiante. En tout, 0,11 ml de surnageant a été transféré dans un flacon d'injection de HPLC en verre de 2,0 ml. Ensuite, 100 ul de PCA 0,5 M dans de l'eau ont été ajoutés. Cinquante microlitres de solution étalon interne (5 ug / ml de 13C5-nicotinamide adénine dinucléotide dans du PCA 0,5 M) ont ensuite été ajoutés suivis de 0,5 ml de PCA 0,5 M dans de l'eau. Les échantillons ont été bouchés et vortexés pendant 20 s. Dix microlitres ont ensuite été injectés sur la LC / MS / MS pour quantifier NAD + en utilisant un d5-NAD + isotopiquement marqué comme étalon interne. La phase mobile A était de 0,5% d'acide formique dans l'eau et la phase mobile B était de 0,5% d'acide formique dans l'acétonitrile. Un gradient linéaire de 0-100% B a été exécuté et la spécification de masse a été réglée sur le mode ion positif en recherchant les transitions de 664,4 → 524,0 (NAD +) et 669,4 → 529,3 (l'étalon interne).

Statistiques

Les critères d'efficacité numériques ont été testés formellement pour la signification entre les groupes par analyse de covariance (ANCOVA). La variable dépendante était la valeur à la fin de l'étude (jour 60); le facteur était le groupe de produits, et la valeur au départ (jour 0) était la covariable. Lorsque les valeurs p de l'ANCOVA et de l'ANOVA suggèrent au moins une différence moyenne, des comparaisons par paires utilisant la procédure de Tukey-Kramer ont été effectuées. L'efficacité significative de NRPT, par rapport au placebo, a été déduite si les comparaisons par paires étaient significativement différentes de zéro (p ≤ 0,05). Le test de Kruskal-Wallis a testé formellement la non-normalité des données de manière insatisfaisante entre les groupes. Lorsque les valeurs p omnibus de Kruskal-Wallis suggéraient qu'au moins une différence moyenne était présente, des comparaisons par paires utilisant les tests de Mann-Whitney ajustés de Bonferroni ont été effectués. L'efficacité significative de NRPT, par rapport au placebo, a été déduite si les comparaisons par paires étaient significativement différentes de zéro (p ≤ 0,05). Une analyse intra-groupe sur les critères d'efficacité a été réalisée à l'aide du test t de Student apparié ou, dans les cas de non-normalité intraitable, du test de Wilcoxon. Toutes les valeurs manquantes dans l'analyse de l'intention de traiter (efficacité) ont été imputées à la valeur la plus récente disponible antérieurement (LOCF, ou imputation «dernière observation-reportée-avant»). Aucune imputation ne sera effectuée pour les valeurs manquantes des variables de sécurité. Aucun changement dans les méthodes d'analyse n'a été effectué après la levée de l'insu. Cependant, une analyse de sensibilité a été effectuée sur tous les ensembles de données incluant le LOCF afin de s'assurer que l'imputation des valeurs manquantes n'avait pas d'impact significatif sur les résultats. Notre analyse de sensibilité n'a pas trouvé de cas où l'imputation a modifié la signification d'une association (analyse non montrée).