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jeudi 3 janvier 2013

Qu'est-ce que électrophorèse?

Le processus d'électrophorèse utilise un champ de charge électrique pour séparer les particules chargées. Il est couramment utilisé en biologie pour séparer l'ADN ou des molécules protéiques. Diverses procédures peuvent être utilisées, selon le type et la taille des molécules à séparer, mais toutes les procédures nécessitent une source de charge, un moyen de support, et une solution tampon.
Toutes les procédures d'électrophorèse des molécules séparées en fonction de leur charge et de la taille. Un champ électrique est appliqué aux molécules, et depuis les molécules sont électriquement chargées, il en résulte une force agissant sur les molécules. Plus la charge de la molécule, plus grande est la force appliquée par le champ électrique et le plus loin de la molécule se déplace à travers le moyen de support. Taille touche aussi à quel point une molécule se déplace - une grosse molécule ne sera pas aller aussi loin que d'une petite molécule avec la même charge. Le rapport de la charge à la masse d'une molécule détermine dans quelle mesure il se déplace à travers le moyen de support.

Les différents types de gels sont le milieu de support le plus couramment utilisé pour l'électrophorèse. Les gels peuvent être sous forme de dalle ou d'un tube. Gel des dalles permettent de nombreux échantillons pour être exécuté en même temps, de sorte qu'ils sont la méthode la plus couramment utilisée dans les laboratoires. Gels en tube, cependant, permettre une meilleure résolution des résultats de l'échantillon, de sorte qu'ils sont parfois un meilleur choix pour l'électrophorèse des protéines.

Le gel d'agarose est une matière commune utilisée pour l'électrophorèse de l'ADN et d'autres acides nucléiques. L'agarose crée une structure à larges pores, de sorte que les grosses molécules qui, souvent, doivent être exécutés à travers le gel d'analyser l'ADN peut se déplacer plus facilement. Un autre type de gel est généralement utilisée si l'objectif est le séquençage de molécules d'ADN plus petits, cependant. Ce gel, appelé gel de polyacrylamide dénaturant ou juste un gel de séquençage, donne des résultats avec une résolution beaucoup plus élevée. Les résultats permettent un scientifique de faire la distinction entre deux segments d'ADN qui diffèrent par une seule paire de bases.

Des gels d'acrylamide sont généralement utilisés pour la séparation des protéines. Le procédé le plus commun est appelé Sodium Dodecyl électrophorèse sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE). SDS est un détergent qui dénaturer les protéines. Le gel est de fonctionner avec un tampon qui contient une couche de faible mobilité des ions et une couche d'ions à haute mobilité. Ces couches aident  à séparer les protéines en fonction de leur taille. Les protéines sont aussi parfois de fonctionner dans des gels natifs, ce qui ne dénature pas les protéines.

Deux techniques plus avancées sont l'électrophorèse capillaire et 2-D. La procédure de forces capillaires molécules à travers un tube capillaire avec la charge électrique et donne des résultats très précis. Électrophorèse 2-D sépare les molécules le long d'un axe x et un axe y. Molécules sont séparés selon leur taille sur un axe et par une charge le long de l'autre axe.